Essai ABTS
Il s'agit d'une méthode analytique qui utilise une mesure spectrophotométrique pour déterminer la capacité antioxydante d'un échantillon. Un spectrophotomètre UV-Vis est utilisé pour mesurer l'absorbance d'une solution contenant le radical ABTS • +, générée par l'oxydation de l'ABST (2, 2'-azinobis (3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonate), substance incolore radicalica est coloré en absorbant les longueurs d’onde caractéristiques dans le domaine visible. L’ajout de molécules antioxydantes à la solution ABTS • +, qui peut agir à la fois sur l’hydrogène et sur un transfert d’électrons, détermine la réduction du radical en une forme incolore, Cette décoloration, proportionnelle à la quantité d'antioxydant présent, peut être mesurée par une diminution de l'absorption dans un certain temps à une longueur d'onde spécifique (734 nm). Le pouvoir antioxydant s'exprime par comparaison à les valeurs d'absorbance mesurées pour des quantités connues d'une molécule antioxydante choisie comme étalon de référence, généralement l'acide ascorbique ou le Trolox (dans ce cas On parle d’activité antioxydante de la capacité antioxydante équivalente de Trolox de TEAC).
La mesure du pouvoir antioxydant basée sur l’utilisation de l’ABTS présente l’avantage d’être simple et rapide. De plus, il permet la mesure d'antioxydants hydrophiles et lipophiles dans une large plage de pH. Cependant, il convient de garder à l'esprit que le radical utilisé (ABTS • +) n'est pas physiologique et n'est pas présent dans les systèmes biologiques et que des problèmes de répétabilité de mesure dus à la cinétique de réaction des différents antioxydants impliqués sont souvent soulignés.
FRAP (pouvoir antioxydant réducteur ferrique)
Le test FRAP mesure la capacité de réduction des antioxydants contre les ions de fer. C'est une méthode basée sur le transfert d'électrons, dans laquelle les ions de fer passent de Fe3 + à Fe2 +. Dans certaines conditions de pH (3, 6) et en présence de TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazine), ces ions forment des complexes de caractéristiques différentes, notamment le dérivé réduit (Fe2 + -TPTZ) prend une couleur bleue ayant une absorption maximale à 593 nm et pouvant être mesurée par spectrophotométrie. La capacité réductrice d'une substance antioxydante peut donc être mesurée en tant que variation de l'absorbance de la solution contenant l'oxydant à la longueur d'onde établie pour la comparaison avec la variation par rapport à un standard (par exemple, l'acide ascorbique).
Le test FRAP a été conçu pour mesurer le pouvoir réducteur du plasma, mais a ensuite été adapté pour tester la capacité antioxydante de composés purs et de matrices complexes. En effet, puisque cette méthode ne permet d’évaluer que la capacité de réduction par transfert d’électrons, ignorant totalement l’action des antioxydants agissant par transfert d’hydrogène, elle ne permet pas de mesurer la contribution de molécules telles que les thiols et les protéines qui jouent un rôle antioxydant. fondamental dans les fluides biologiques (par exemple le sang). L’avantage de cette méthode est qu’elle est l’une des méthodes les plus simples, les plus rapides et les moins coûteuses pour déterminer la capacité antioxydante in vitro.
TEST DPPH
Le 2, 2-diphényl-1-picrilidrazyle (DPPH •) est un radical azote très stable et disponible dans le commerce, caractérisé par une couleur rouge violacé intense, qui se décolore lorsqu'il est réduit en présence d'une molécule ayant un pouvoir antioxydant. Par mesure spectrophotométrique à 517 nm de la variation d'absorbance de la solution de DPPH après réaction avec un composé antioxydant, il est possible de quantifier le pouvoir réducteur de la substance d'essai, qu'elle agisse par transfert d'hydrogène ou par transfert électronique. Le résultat est généralement exprimé en IC50, c'est-à-dire la quantité d'antioxydant capable de réduire de 50% la concentration initiale de DPPH.
C'est une méthode rapide, simple et économique. Les limites de cette technique analytique sont données par la possibilité que les résultats de l'analyse soient faussés dans le cas où les molécules à tester absorbent dans le même domaine de longueur d'onde que le radical DPPH ou en présence de grosses molécules encombrées de manière stérique qui ne le sont pas. ils réagissent avec la partie réactive de la racine. Cela détermine que le DPPH réagit avec les antioxydants jusqu'à 1000 fois plus lentement que les radicaux peroxyle.
PCL TEST (Photochemiluminescence)
Le test PCL est basé sur la réaction d'une espèce radicalaire spécifique, l'anion superoxyde (O2 • -), généré photochimiquement par les rayons UV, avec un composé capable d'émettre une chimiluminescence. Le marqueur utilisé est le luminol, une molécule qui, lorsqu'elle est oxydée par les radicaux libres, émet une lumière qui peut être mesurée à l'aide d'un instrument spécial (Photochem®). La présence d'antioxydants dans le mélange de rationnement désactive l'espèce radicalaire en inhibant l'émission de chimioluminescence. L'analyse PCL est très rapide et sensible. De plus, avec l'application de deux protocoles d'analyse différents, appelés ACW (capacité antioxydante soluble dans l'eau) et ACL (capacité antioxydante lipidique soluble), les contributions à la capacité antioxydante totale du composant hydrosoluble (flavonoïdes, vitamine) peuvent être mesurées pour le même composé. C, acides aminés, etc.) du liposoluble (tocophérols, tocotriénols, caroténoïdes, etc.). Pour comparer les valeurs enregistrées avec les mesures relatives aux molécules de référence standard, l'acide ascorbique pour le protocole ACL et le Trolox pour le protocole ACW, la capacité antioxydante du produit à tester est obtenue.
