généralité
L'immunofixation est un test de laboratoire permettant d'identifier et de typer les gamma-globulines présentes dans un échantillon biologique.
En détail, l'analyse permet d'étudier - dans le sang ou dans l'urine du patient - les classes d'immunoglobulines (IgA, IgG, IgM, IgE ou IgD) et le type de chaînes légères kappa ou lambda, en fonction de leur mobilité électrophorétique spécifique . Par la suite, pour l’identification de la gamma globuline impliquée, l’immunofixation implique l’inoculation d’antigènes spécifiques du fragment ou de l’anticorps correspondant ( antisérums anti-immunoglobuline ): la présence de la modification suspectée est confirmée par la formation d'un précipité visible à l'œil nu ou au microscope.
Cette information est d'une grande importance pour établir, notamment, le diagnostic des maladies des cellules plasmatiques (gammapathies ou dyscrasies plasmocytaires). L'immunofixation est très utile pour l'évaluation et le suivi du myélome multiple, de la macroglobulinémie de Waldenström et de l'amylose primaire (également appelée amylose à chaîne légère).
quoi
L' immunofixation (ou immunoélectrophorèse, également abrégée en acronyme IFE ) est une technique permettant de déterminer si et quelle classe d'immunoglobulines (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) ou un type de chaîne légère kappa ou lambda est présente excès ou défaut dans le sérum sanguin et dans l'urine du patient.
Les chaînes légères kappa et lambda caractérisent le composant monoclonal, c’est-à-dire les anticorps ayant exactement la même structure chimique.
Immunofixation urinaire et urinaire: quand est-il indiqué?
Les dyscrasies ou gammapathies plasmacellulaires constituent un groupe hétérogène de troubles d'étiologie inconnue, caractérisé par:
- La prolifération d'un clone de cellules B est disproportionnée .
- Présence dans le sérum et / ou l'urine d'un type d' immunoglobuline (ou de sa sous-unité polypeptidique) homogène sur le plan structurel et électrophorétique ( monoclonal ).
Les dyscrasies plasmocytaires sont généralement diagnostiquées par électrophorèse des protéines sériques et urinaires, suivie d'une immunofixation sérique (IFE).
Dans le même temps, une analyse de sang peut être prescrite pour mesurer la concentration totale d'immunoglobuline (IgG + IgM + IgA).
Pour en savoir plus: Les immunoglobulines - Ce qu’elles sont, comment elles se mesurent et les valeurs de référence »Immunofixation: principe de base
L'immunofixation est un examen en deux phases (d'abord l' électrophorèse sur gel d'agarose, puis l' immunoprécipitation avec des antisérums spécifiques ).
La première étape de l’immunofixation est la même que celle de l’ ELECTROPHORÈSE des protéines (ou protidogrammes), il est donc nécessaire de rappeler un concept:
- L’électrophorèse est une analyse en laboratoire qui permet de déterminer la quantité de protéines présentes dans le sérum sanguin ou d’autres échantillons biologiques et, pour chaque fraction, elle révèle la présence d’anomalies de qualité. En particulier, ce test permet de séparer les protéines en cinq groupes: albumine, alpha 1-globulines, alpha-2-globulines, bêta-globulines et gamma-globulines ; ces derniers sont plus spécifiquement étudiés avec l'immunofixation.
- L'électrophorèse est une méthode de séparation basée sur la vitesse de migration différente des particules chargées électriquement, à travers une solution et un support inerte, sous l'influence d'un champ électrique généré par un courant continu. En pratique, le test exploite la charge électrique et la masse moléculaire des protéines présentes dans l’échantillon du patient. Sous l'impulsion d'un champ électrique, ces macromolécules migrent et se "groupent" par type, répondant au stress de manière caractéristique. Le résultat ( modèle électrophorétique ) consiste en divers pics et courbes auxquels correspondent les fractions de protéines. Normalement, le premier pic, plus haut et plus étroit, est celui de l' albumine ; à suivre, les pics des globulines sont observés, beaucoup plus bas que l'albumine. L'augmentation ou la diminution de l'amplitude et de l'intensité des pics formés dans la trace indique une présence plus ou moins importante des protéines de chaque catégorie; plus il y a de protéines dans une bande, plus le pic respectif est élevé. Dans le cas des gamma globulines, si vous souhaitez connaître la quantité de chacune des différentes classes (IgA, IgM, IgG, etc.), vous devrez recourir à la posologie unique. En général, plus il y a de gammaglobulines dans une bande, plus le pic respectif est élevé; la hauteur correspond à la quantité totale de protéines appartenant à une certaine catégorie.
L'IMMUNOFISSAZIONE prévoit:
1) Electrophorèse sur gel d’agarose : l’échantillon du patient (sérum ou urine) est déposé sur une bande électrophorétique, c’est-à-dire le support de migration (généralement du gel d’agarose). L'application d'un champ électrique, généré par un courant continu, permet d'obtenir une séparation dans différentes bandes. En pratique, chaque type de gamma globuline présente dans le mélange (c'est-à-dire dans l'échantillon du patient) migre en fonction de la masse moléculaire et de la charge électrique. La mobilité électrophorétique différente des gamma-globulines permet de les identifier (chacune d’elles coïncide avec une bande spécifique du trajet électrophorétique) et d’observer les anomalies éventuelles.
2) Immunoprécipitation avec des antisérums spécifiques (fixation) : les antigènes spécifiques d'un anticorps ou d'un fragment donné (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-lumière kappa ou anti-chaîne ) sont ajoutés individuellement à chaque bande électrophorétique. chaîne légère lambda). Si une protéine monoclonale est présente, l'interaction de l'antigène avec l'anticorps correspondant produira une bande étroite (le résultat sera positif) et la formation d'un précipité visible à l'œil nu ou au microscope. Finalement, l’échantillon est traité (c'est-à-dire lavé et coloré) pour éliminer les protéines qui n'ont pas précipité, pour obtenir le séchage du gel et procéder à la lecture des résultats.
Pourquoi oui
À quoi sert l'immunofixation?
L'immunofixation sérique est un test indiqué pour diagnostiquer ou surveiller les maladies caractérisées par une altération de la gamma globuline, en particulier lorsqu'il s'agit de la production du composant monoclonal ( gammapathie monoclonale ).
En savoir plus: Les gammopathies monoclonales - Qu'est-ce que c'est et ce qu'elles sont »L'immunofixation est utile en cas de suspicion de dyscrasie plasmacellulaire et est essentielle pour l'étude de MIELOMA (et de maladies apparentées) et de MGUS (acronyme de "monoclonal gammapatie of uncertain sens").
Cet examen permet également d’évaluer la macroglobulinémie de Waldenström et l’amyloïdose à chaîne légère ( AL ).
Immunofixation: quand l'examen est-il prescrit?
L'indication d'immunofixation fait suite à des résultats cliniques ou de laboratoire qui permettent de suspecter des modifications des anticorps monoclonaux ou des immunoglobulines dans le sérum ou l'urine.
Par exemple, ce test permet d’approfondir le résultat de l’électrophorèse séropro ou urinaire: lorsque dans le trajet électrophorétique, les bandes qui correspondent aux gamma globulines s’écartent de la normalité, l’immunofixation identifie laquelle de ces protéines est modifiée en quantité et de qualité.
En résumé, l'immunofixation sérique peut être prescrite:
- Si d’autres tests de laboratoire donnent des résultats anormaux, en termes d’absence ou de quantités de protéines plasmatiques inférieures et supérieures à la normale;
- Lorsque nous soupçonnons la présence de maladies caractérisées par la production d'un composant monoclonal, telles que:
- Myélome multiple et ses variantes;
- Macroglobulinémie de Waldenström;
- amyloïdose;
- Lorsque le patient présente des symptômes et des signes qui permettent de suspecter la présence d'une gammapathie monoclonale ou d'un myélome multiple, tels que:
- Douleurs osseuses;
- L'anémie;
- Fatigue facile;
- Infections récurrentes;
- Fractures inexpliquées.
Dans le cas du myélome multiple, l'électrophorèse de protéines et l'immunofixation sont également très utiles pour surveiller l'évolution de la maladie (suivi).
Immunofixation: sur quels échantillons peut-on effectuer?
Les échantillons biologiques susceptibles d’être soumis à l’immunofixation sont principalement:
- Sérum (immunofixation sérique);
- Urine (immunofixation urinaire);
- Liqueur * (immunofixation de liqueur).
* Remarque : le liquide céphalo-rachidien est le liquide qui imprègne et protège le cerveau, la moelle épinière, les nerfs crâniens et les racines dorsales.
Valeurs normales
Un résultat NÉGATIF d'immunofixation sérique et urinaire pour les gamma-globulines monoclonales ou polyclonales est considéré comme NORMAL .
Gamme Globuline
Les gamma globulines représentent 9 à 20% du total des protéines plasmatiques.
- Valeur de référence Gamma globulines : 0, 9-1, 4 g / dl
En ce qui concerne la concentration totale d'immunoglobulines ( IgG + IgM + IgA ), on pense que les valeurs comprises entre 600 et 2300 mg / dl sont normales.
- Valeur de référence Immunogobuline dans le sérum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Remarque : l'intervalle de référence de l'examen peut varier légèrement en fonction de l'âge, du sexe et de l'instrumentation utilisée dans le laboratoire d'analyse. Pour cette raison, il est préférable de consulter les plages indiquées directement dans le rapport. Il convient également de rappeler que les résultats des analyses doivent être évalués dans leur ensemble par le médecin généraliste, qui connaît la situation anamnestique du patient.
Hautes valeurs - Causes
L'augmentation des gamma globulines peut être:
- Polyclonale, si la production d’immunoglobulines est hétérogène, c’est-à-dire que tous les composants de la gamme des globulines - produits ou dérivés de plasmocytes différents - sont affectés par l’augmentation;
- Monoclonale, lorsque les gamma-globulines sont produites ou dérivées d’un seul type (clone) de plasmocytes.
L’augmentation de la gamme des globulines polyclonales peut être associée à:
- Maladies inflammatoires chroniques;
- La polyarthrite rhumatoïde;
- Lupus érythémateux disséminé;
- Maladies chroniques du foie (telles que l'hépatite et la cirrhose);
- Infections aiguës et chroniques;
- Vaccinations récentes;
- Certaines maladies cancéreuses.
Des valeurs gamma élevées de globuline monoclonale peuvent indiquer, au contraire, la présence de:
- Quelques néoplasmes et inflammations chroniques;
- Myélome multiple;
- lymphome;
- Macroglobulinémie de Waldenström.
Un excès de gamma globuline est appelé hypergammaglobulinémie, alors qu'une déficience est appelée hypogammaglobulinémie .
Valeurs faibles - Causes
La réduction des gammaglobulines peut indiquer la présence de diverses maladies génétiques du système immunitaire, notamment l' agammaglobulinémie ou une immunodéficience secondaire (par exemple, SIDA, insuffisance rénale, sepsie aiguë et syndrome de Cushing).
La diminution des valeurs de gamma globuline peut également dépendre de la consommation de médicaments cytostatiques, d'immunosuppresseurs et de stéroïdes.
Comment effectuer
Immunofixation Sieric
L'immunofixation sérique implique un simple prélèvement de sang d'une veine du bras. Le sérum est obtenu par centrifugation de l'échantillon biologique; cela permet en effet de séparer la fraction contenant les cellules (partie corpusculaire) de la partie liquide du sang (plasma). Le sérum sanguin est exempt de facteurs de coagulation (fibrinogène, facteur VIII, facteur V et prothrombine).
Immunofixation urinaire
Pour réaliser l’immunofixation urinaire, il est nécessaire de recueillir une petite quantité d’urine dans un récipient stérile spécial. Selon les indications du médecin et du laboratoire, l'échantillon peut être prélevé sans délai précis ( aléatoire ) ou dans les 24 heures .
Immunofixation de la liqueur
L'analyse nécessite l'extraction d'une petite quantité de liquide céphalo-rachidien, en insérant une aiguille, dans la cavité rachidienne ( ponction lombaire ).
préparation
Immunofixation: comment se préparer à l'examen?
- Avant le prélèvement de sang, certains laboratoires peuvent nécessiter un jeûne d’au moins 10 à 12 heures. Pendant cette période, il est permis de prendre une petite quantité d’eau.
- L'immunofixation peut être réalisée sur l' urine collectée à une heure précise de la journée (au hasard) ou pendant les 24 heures, il est donc nécessaire d'obtenir à l'avance les contenants stériles appropriés.
- En ce qui concerne l'immunofixation de la liqueur, aucune préparation spéciale n'est requise.
Qu'est-ce qui peut altérer le résultat de l'examen?
Certains médicaments peuvent affecter l’issue de l’immunofixation. Il est donc conseillé de signaler au médecin tout traitement pharmacologique en cours.
Au cours des six mois précédant l'examen, l'administration de vaccins (immunisation) et l'utilisation de médicaments tels que la phénytoïne, la procaïnamide, les contraceptifs oraux, la méthadone et les gamma-globulines thérapeutiques peuvent augmenter la concentration en immunoglobulines. Les autres médicaments pouvant altérer le résultat du test sont les corticostéroïdes, la néomycine, l'acide acétylsalicylique et la chlorpromazine.
Interprétation des résultats
Le résultat de l'immunofixation est évalué en combinaison avec les résultats d'autres analyses. L’interprétation de la découverte incombe au médecin généraliste ou au spécialiste de référence qui peut identifier et signaler les altérations d’une gamma-globuline spécifique (par exemple, la bande qui coïncide avec les immunoglobulines G) de certaines maladies. Cette évaluation confirme ou confirme l’hypothèse diagnostique: en général, l’immunofixation peut révéler un profil de gamma globuline normal ou identifier une protéine monoclonale ou un modèle polyclonal .
Une fois la maladie définie, l’immunofixation peut être réalisée pour:
- Surveillez la maladie au fil du temps, puis suivez le cours (suivi);
- Vérifier l'efficacité du protocole thérapeutique .
Avantages et inconvénients de l'immunofixation
Par rapport à l'électrophorèse des protéines, immunofixation:
- C'est plus rapide : les résultats de l'immunofixation sont généralement obtenus dans les trois heures;
- Elle est plus sensible (bien que légèrement): l’immunofixation peut révéler une immunoglobuline exclue de l’électrophorèse des protéines, en particulier à faible concentration (moins de 1 gramme / litre).
En outre, l'immunofixation:
- Il peut être partiellement automatisé .
- Il est facilement lisible et interprétable .
Cependant, l’immunofixation coûte plus cher que l’électrophorèse de protéines et ne permet que l’analyse des gamma globulines .
Résultat normal
Dans l'immunofixation, un chemin normal comprend:
- Une bande qui coïncide avec l’immunoglobuline G ( IgG ) plus foncée;
- Une bande correspondant à l’immunoglobuline A plus légère ( IgA );
- L'absence de bande pour l'immunoglobuline M ( IgM );
- La bande kappa est plus dense que celle de la lambda (chaîne légère), avec un rapport de 2: 1.
Dans un résultat normal, les bandes sont grandes et il y a une réduction progressive et uniforme de la densité de la couleur vers les bords de la bande d'immunoélectrophorèse.
Gamma globulines polyclonales
Dans certains cas, toutes les bandes de l'immunofixation sont masquées de manière homogène dans la même mesure. Ce modèle représente la présence d' immunoglobulines polyclonales . Dans ce cas également, les bandes sont grandes et la transition vers les bords de la bande immunoélectrophorétique est progressive. La bande des IgM - normalement absente - est large.
Gamma globulines monoclonales
Lorsqu'une bande étroite avec des arêtes vives peut être identifiée dans le chemin d'immunofixation, cela signifie que la recherche de composants monoclonaux est positive .
L’identification d’une immunoglobuline monoclonale est utile dans le diagnostic des affections suivantes:
- Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (MGUS);
- Myélome multiple;
- Macroglobulinémie de Waldenström;
- Amyloïdose.
En outre, l'immunofixation peut être utilisée pour surveiller le traitement des dyscrasies plasmocytaires (c.-à-d. Myélome multiple et macroglobulinémie de Waldenström). Si le niveau de protéine monoclonale diminue ou n'est pas détectable après la chimiothérapie, cela peut indiquer une réponse au traitement . En revanche, une protéine monoclonale persistante malgré le traitement est un signe de maladie réfractaire .
Note Un résultat négatif à l'immunofixation n'exclut pas toujours une dyscrasie plasmacellulaire. Par exemple, un myélome multiple non sécréteur ou oligosécréteur multiple peut donner des résultats négatifs à la fois dans l'urine et le sérum. Par conséquent, si la suspicion diagnostique de gammapathie est toujours élevée, il est indiqué de déterminer le rapport des chaînes Kappa / Lambda Libere claires (rapport K / L ).
Immunofixation et diagnostic de la sclérose en plaques
L' immunofixation du liquide céphalorachidien (LCR) est prescrite lorsque le médecin soupçonne la présence d' une sclérose en plaques . Dans ce cas, la trace déterminée est caractéristique car elle met en évidence la présence des bandes dites oligoclonales . Le résultat est signalé en laboratoire comme positif . Il faut considérer que les bandes ne sont normalement pas observées dans l'immunofixation sérique, car elles sont en corrélation avec la production de gamma-globulines intrathécales .
Cependant, il convient de noter que cette découverte ne confirme pas nécessairement le diagnostic, d'autres conditions pouvant présenter des bandes oligoclonales dans le liquide céphalorachidien.
En d'autres termes, l'identification des bandes oligoclonales avec l'immunofixation de la liqueur est très utile pour étayer le diagnostic de la sclérose en plaques, mais doit être confirmée par d' autres investigations . L' inflammation du système nerveux central est une autre affection pouvant donner de tels résultats: encéphalite liée au VIH, neurosyphilis, neurosarcoïdose, méningo-encéphalite de Lyme, tumeurs malignes du SNC, neuromyélite optique et myélite transverse.
